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人糖基化依賴的細(xì)胞黏附分子ELISA試劑盒組成及其配置：

1. 酶聯(lián)板(Assay plate )

2. 標(biāo)準(zhǔn)品(Standard)

3. 稀釋液(Sample Diluent)

4.檢測抗體-HRP（HRP-Conjugate reagent

5. 終止液(Stop Solution)

6. 底物溶液（Chromogen Solution）

7. 20x濃縮洗滌液(20X WashSolution)

8.說明書（User manual）

9.封板膜（Closure plate membrane）

10.自封袋（Sealed bags）

實驗前的準(zhǔn)備：

1） 確定試劑盒在有效期內(nèi)

2） 仔細(xì)閱讀說明書，按說明書確定所有試劑齊全（數(shù)量、體積）

3） 提前準(zhǔn)備好所有實驗額外所需的設(shè)備（如離心機(jī)、37℃恒溫箱、高精度加樣器及槍頭、酶標(biāo)儀等）

4） 標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實驗者注意低溫保存。根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量

5） 按說明書將所有試劑平衡至室溫，配制所需試劑。嚴(yán)格按照上海軒澤康生物有限公司說明書進(jìn)行實驗步驟。

人糖基化依賴的細(xì)胞黏附分子ELISA試劑盒操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL。

3.  樣本孔先加待測樣本10μL，再加稀釋液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.   每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.   每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

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