大鼠嘔吐毒素（DON）ELISA快速檢測試劑盒采用競爭法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被嘔吐毒素（DON）抗原的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的競爭抗原，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的嘔吐毒素（DON）呈負相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

大鼠嘔吐毒素（DON）ELISA快速檢測試劑盒組成：

注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、1.25、2.5、5、10、20 ppb

結(jié)果判斷

1.  15分鐘內(nèi)在波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值；

2.  百分結(jié)合率計算：設(shè)S0管計數(shù)為B0，各標(biāo)準(zhǔn)管或樣品管計數(shù)為B，非特異管計數(shù)為NSB，則百分結(jié)合率計算公式如下：B/B0=(B－NSB)/(B0－NSB)×100%

3.  logit計算:各標(biāo)準(zhǔn)點或樣品管的logit值計算公式如下:logit=ln(B/B0)/(1－B/B0)

4.  將標(biāo)準(zhǔn)品的OD均值與標(biāo)準(zhǔn)品0點的OD均相除，為標(biāo)準(zhǔn)點的百分結(jié)合率，在log-logit坐標(biāo)紙上繪圖。

5.  Log-logit雙對數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線：坐標(biāo)紙上橫軸從左至右第一個1-9表示為第一個10進位，第二個1-9表示為第二個10進位。第三個1-9表示為第三個10進位。坐標(biāo)紙縱軸為百分比（1-99），即各標(biāo)準(zhǔn)吸光值的百分結(jié)合率。取一條通過各點的直線。要求盡可能多的點在線上，同時剩余的點均勻分布在直線的兩邊。樣品也同樣由吸光值計算百分結(jié)合率，再從縱軸上的相應(yīng)結(jié)合率找到直線上的點，此點對應(yīng)的橫坐標(biāo)濃度即為樣品的濃度，無須換算。

6.  人工處理：以標(biāo)準(zhǔn)濃度取log值為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的logit值為縱坐標(biāo)在普通坐標(biāo)紙上或以標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的B/B0為縱坐標(biāo)在logit-log坐標(biāo)紙上畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線（理想化時是一條直線）。根據(jù)待測樣

品的B/B0可以從坐標(biāo)紙上查出樣品的濃度值。如果使用普通坐標(biāo)紙，查出的數(shù)值應(yīng)取反對數(shù)才是最后的濃度值。

7.  自動處理：使用logit-log或四參數(shù)數(shù)據(jù)處理模式，由電腦自動計算得出結(jié)果。

8.  敏感度：0.25 ppb

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